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PCR擴增試劑盒的實驗注意事項介紹

更新時間:2021-09-26      點擊次數(shù):830
  PCR擴增試劑盒適用于常規(guī)的PCR反應和一些結(jié)構(gòu)復雜的模板如GC含量高、有二級結(jié)構(gòu)等的PCR擴增,由于多種PCR增強劑和穩(wěn)定劑的發(fā)現(xiàn),穩(wěn)定預配好的PCR混合液不僅簡化了操作程序、減少了污染、降低勞動強度和取樣誤差,而且增加了PCR反應的特異性,降低了對PCR條件的要求,可擴增2個拷貝的目的模板,使實驗結(jié)果更加。該產(chǎn)品分為含染料和不含染料兩種體系,在PCR結(jié)束后可以直接電泳,無需再加入上樣緩沖液。
  PCR擴增試劑盒實驗事項:
  1.樣本上PCR平臺可做的樣本包括血液,唾液,口腔拭子,在實驗中,對于DNA投入量要求不是很高,根據(jù)不同項目需求,DNA投入量的范圍在100pg到100ng之間。
  2.進行PCR反應前,可以將所有g(shù)DNA的濃度稀釋到同一濃度,并轉(zhuǎn)移到PCR8聯(lián)管中,一方面是便于排槍操作,另一方面是加入相同起始量的gDNA,這樣可以降低終文庫的濃度差異,便于混合文庫。
  3.大多數(shù)情況下引物是1管,操作相當方便;當目標區(qū)域是外顯子或者是其他連續(xù)區(qū)域時,把引物分裝為2管,需要第二輪PCR前把產(chǎn)物合并,再進行下一步反應。
  4.執(zhí)行多重PCR反應時,特別是樣本量多的情況下,可以將T1設(shè)為一組,T2設(shè)為一組,便于制備反應試劑混合液和排槍操作;并把解凍好的試劑放置在冰盒上,在冰盒上進行加樣操作。
  5.實驗中,可以在PCR管壁上和管蓋上同時進行反應編號標記,防止高溫或其他原因?qū)е掠浱栂В苊夂罄m(xù)產(chǎn)物混合操作失誤,造成樣本交叉污染。

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