探針法PCR檢測試劑盒的測試原理

　　探針法PCR檢測試劑盒的原理在于PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；剛開始時,探針結(jié)合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴增時，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。

　　探針法PCR檢測試劑盒檢測方法的局限性：

　　1.樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運送以及保存質(zhì)量有關(guān)；

　　2.樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現(xiàn)假陽性結(jié)果；

　　3.陽性對照、擴增產(chǎn)物泄漏，會導(dǎo)致假陽性結(jié)果；

　　4.病原體在流行過程中基因突變、重組，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

　　5.試劑運輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準(zhǔn)確的結(jié)果；

　　6.本檢測結(jié)果僅供參考，如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。

　　探針法PCR檢測試劑盒常用于熒光免疫法中標(biāo)記抗原或抗體，亦可用于微環(huán)境，如表面活性劑膠束、雙分子膜、蛋白質(zhì)活性位點等處微觀特性的探測。通常要求探針的摩爾吸光系數(shù)大，熒光量子產(chǎn)率高；熒光發(fā)射波長處于長波且有較大的斯托克斯位移；用于免疫分析時，與抗原或抗體的結(jié)合不應(yīng)影響它們的活性。