豬瘟病毒野生株PCR檢測試劑盒說明書

注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

原理是由一對引物介導，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經過n個熱循環(huán)擴增，擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；
?
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

衛(wèi)矛醇半固體瓊脂/Dulcitol Semisolid Agar細菌衛(wèi)矛醇發(fā)酵試驗10克國產/進口

五號膽/5號膽/膽5號/膽酸-脫氧膽混合物/Bile salt No. 5BR，70%25克國產/進口

人臍帶單核細胞*培養(yǎng)基PANC-1(人胰腺細胞)

酸球菌亞種 Lactococcus lactis subsp. Lactis釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

哥倫比亞CAN瓊脂基礎/Columbia CAN Agar Base分離革蘭氏陽性球菌250克國產/進口

LM/TK(小鼠胸腺激酶缺陷細胞)蘇云金芽胞桿菌多窩亞種 Bacillus thuringiensis subsp. tolwerthi

大鼠角膜成纖維細胞*培養(yǎng)基小鼠晶狀體上皮細胞*培養(yǎng)基

NCI-H661(人大細胞肺細胞)5×106cells/瓶×2

CCD-1095Sk(人腺浸潤性導管旁膚細胞)5×106cells/瓶×2

RH-35(大鼠肝細胞)釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

T84(人結腸腺肺轉移細胞)人腎成纖維細胞*培養(yǎng)基

豬瘟病毒野生株PCR檢測試劑盒說明書中性蛋白酶(含100mL酶解緩沖液)10mL

雙歧桿菌瓊脂培養(yǎng)基（BBL瓊脂培養(yǎng)基） 規(guī)格： 250g 用途： 用于雙歧桿菌的平板計數

血紅蛋白(HB)天然蛋白   Native Hemoglobin (HB)  

補體成分7(C7)重組蛋白  Recombinant Complement Component 7 (C7)

基質金屬蛋白酶13(MMP13)重組蛋白  Recombinant Matrix Metalloproteinase 13 (MMP13)

神經生長因子(NGF)重組蛋白  Recombinant Nerve Growth Factor (NGF)

運動因子相關蛋白1(MRP1)重組蛋白  Recombinant Motility Related Protein (MRP1)

HSC-T6(大鼠肝星形細胞)5×106cells/瓶×2

M-NFS-60 (小鼠白血病細胞G-CSF依賴性)5×106cells/瓶×2

USMC(大鼠血管平滑肌細胞)5×106cells/瓶×2

人食管細胞  Kyse510

小鼠淋巴瘤細胞  EL4

細菌L型分離瓊脂L型細菌增菌培養(yǎng)110克國產/進口

鈉蔗糖瓊脂/Sodium Chloride Sucrose Agar副溶血性弧菌的選擇性分離培養(yǎng)250克國產/進口

標準胎牛血清/Fetal bovine serum(Characterized FBS)BR200毫升國產/進口

CCDA添加劑/CCDA Supplement添加于200Lccda基礎中2毫升×10支國產/進口

技術原理：
 DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈式反應實驗中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，并設計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。（ DNA高溫變性低溫復性）
       發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶，使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術得以大量應用，并逐步應用于臨床。