鴨乙型肝炎病毒PCR檢測試劑盒說明書

原理是由一對引物介導，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增，擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
 特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；

注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

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實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術(shù)原理：
 DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據(jù)堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈式反應(yīng)實驗中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，并設(shè)計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。（ DNA高溫變性低溫復性）
       發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。

IR983F(大鼠骨髓瘤細胞)5×106cells/瓶×2

胰蛋白酶-EDTA(含100mL酶解緩沖)蘇云金芽孢桿菌 Bacillus thuringiensis

大鼠支氣管上皮細胞*培養(yǎng)基100mL

小鼠胎兒表角質(zhì)形成層細胞*培養(yǎng)基100mL

月桂基硫酸胰蛋白胨肉湯/LST肉湯/LST Broth各種食品中大腸菌群近似值(MPN)測定250克國產(chǎn)/進口

MA-891(小鼠腺高轉(zhuǎn)移細胞)5×106cells/瓶×2

體硫乙醇酸培養(yǎng)基/需氣菌厭氣菌培養(yǎng)基/Thioglycollate Medium用于培養(yǎng)需氧菌、微需氧菌和厭氧菌250克國產(chǎn)/進口

木瓜蛋白酶(含100mL酶解緩沖)熒光假單胞菌 Pseudomonas fluorescens

蜜環(huán)菌 Armillariella mellea

小鼠晶狀體上皮細胞*培養(yǎng)基100mL

MFC(小鼠胃細胞)5×106cells/瓶×2

鴨乙型肝炎病毒PCR檢測試劑盒說明書好食脈孢菌 Streptomyces venezuelae var.spiralis粘質(zhì)沙雷氏菌 Serratia marcescens

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae檸檬串珠菌 Leuconostoc citreum

SHZ-88(大鼠腺細胞)冠突曲霉 Bacillus thuringiensis

激肽釋放酶9(KLK9)重組蛋白  Recombinant Kallikrein 9 (KLK9)

皺枝孢 Cladosporium delicatulum熱帶假絲酵母 Candida tropicalis

伊紅美蘭瓊脂/EMB瓊脂/伊紅美藍瓊脂/曙紅亞甲藍瓊脂/伊紅次甲基藍瓊脂/EMB Agar腸道致病菌的分離，亦可用于大腸埃希氏菌的分離和鑒別250克國產(chǎn)/進口

大鼠氣管上皮細胞*培養(yǎng)基百脈瘤菌 Rhizobium loti

SW 1990(人胰腺細胞)香菇 Lentinula edodes

人結(jié)直腸腺上皮細胞  DLD-1

褐球固氮菌 Azotobacter chrooccumHCT116, 人結(jié)直腸細胞

EJ(人膀胱細胞)5×106cells/瓶×2